液相色譜技術(shù)在基因雜質(zhì)分析中的重要作用
高效液相色譜技術(shù)(HPLC) HPLC 作為最傳統(tǒng)的方法在雜質(zhì)分離中仍然使用得最多。
通過各種色譜柱技術(shù)以及聯(lián)用技術(shù)能夠?qū)^大多數(shù)化合物實(shí)現(xiàn)分離、分析。
為了解決與紫外檢測器聯(lián)用靈敏度低的問題，新型二維 高 效 液 相 色 譜 (2D-HPLC)利用了液相色譜技術(shù)分離和富集的特點(diǎn)提高了對低濃度雜質(zhì)的檢測能力。
目前，HPLC 無論采用正相洗脫還是反相洗脫都需消耗大量的有機(jī)溶劑，這對環(huán)境帶來較大的污染，因此提出以水或其他環(huán)境友好的試劑為主要洗脫溶劑的新型液相色譜技術(shù)正得到廣泛的研究。
超高效液相色譜技術(shù)(UHPLC) 為了應(yīng)對藥物研發(fā)的需要，UHPLC 作為一種快速分離的色譜技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn)在各種藥物的開發(fā)上。
根據(jù)UHPLC 的使用方法，討論了如何針對不同樣品建立穩(wěn)定的 UHPLC 方法。
手性分離方面，UHPLC目前并沒有大量小于2 μm 粒徑的商品化手性色譜柱，但是利用傳統(tǒng)的手性流動相添加法也可實(shí)現(xiàn)對手性雜質(zhì)進(jìn)行分離。
在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)方面，分析實(shí)驗(yàn)室目前仍以 HPLC 為主要研究儀器，但為了獲得類似于UHPLC 分離效能，許多科研工作者通過優(yōu)化 HPLC系統(tǒng)同時(shí)使用核殼型色譜柱實(shí)現(xiàn)了快速分離。
以液態(tài)CO2 為主要流動相的SFC 技術(shù)，由于其與紫外聯(lián)用檢測靈敏度低，其發(fā)展一直非常緩慢，但質(zhì)譜檢測器(MS)的普及以及環(huán)境友好型社會的需要，使 SFC 能用于分離手性雜質(zhì)。
雖然 SFC 與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)用于雜質(zhì)分析已有相關(guān)報(bào)道 ，但商品化的 SFC-MS聯(lián)用儀器并未大量出現(xiàn)。
為實(shí)現(xiàn)對雜質(zhì)的定量及定性分析，需要獲取高純度單一成分的雜質(zhì)，然而雜質(zhì)在藥物中含量較低，利用分析型液相色譜技術(shù)制備雜質(zhì)需要消耗大量時(shí)間，利用制備型液相色譜技術(shù)等方法可提高高純度雜質(zhì)的獲取速度，加快雜質(zhì)研究工作。制備型液相色譜技術(shù)和制備型SFC技術(shù)經(jīng)純化的雜質(zhì)可獲得更高質(zhì)量的圖譜，但藥物中雜質(zhì)含量低的問題一直制約著雜質(zhì)單體的獲取速度。
利用液質(zhì)聯(lián)用方法可獲得雜質(zhì)的來源與簡單結(jié)構(gòu)，再利用強(qiáng)制降解 、結(jié)晶母液或直接合成等方式可制備出雜質(zhì)單體制備技術(shù)上。
為了克服常規(guī)一維制備型液相色譜技術(shù)以及制備型SFC 色譜技術(shù)的方法建立困難、制備時(shí)間較長等缺點(diǎn)而提出制備型的二維液相色譜技術(shù)(Prep 2D-LC)以及二維 SFC 色譜技術(shù)已得到越來越多的應(yīng)用。一種新型的 Prep 2D-LC，該儀器首先通過一維液相色譜對樣品進(jìn)行初步分離，并用質(zhì)譜相對分子質(zhì)量監(jiān)控和中心切割的方式將目標(biāo)物保存在樣品環(huán)(Sample loop)中，再利用在柱洗脫(at column dilution)的方法將樣品環(huán)中的樣品進(jìn)樣至第二維液相色譜中，第二維液相色譜通過使用與第一維相同或者不同的流動相對樣品進(jìn)行進(jìn)一步分離同時(shí)使用質(zhì)譜監(jiān)控方法即可得到更高純度的目標(biāo)物。這種新方法不僅替代了一維制備型液相色譜，同時(shí)解決了傳統(tǒng)制備2D-LC 系統(tǒng)高壓以及峰展寬的問題。
